Микроорганизмдердің морфологиясы мен құрлысын топтастыру негіздері

Микроорганизмдер (лат. micros-кіші) — көзге көрінбейтін организмдер. Оларға қарапайым, спирохеттер, саңырауқұлақтар, бактериялар, вирустар жатады, морфологиясы оларды зерттеумен микробиология айналысады. Микроорганизмдердің шамасы микрометрмен (мкм) өлшенеді. Микромирде биологиялық жіктеудің жалпы принциптерін ескере отырып топтарға бөлінетін формалардың алуан түрлілігі бар.

Бірінші жалпы биологиялық классификация XVIII ғасырда құрылған швед ғалымы К. Линнейдің морфологиялық белгілеріне негізделген және жануарлар мен өсімдіктер әлемін қамтитын жүйесі болды. Ғылымның дамуымен байланысты классификацияда тек морфологиялық ғана емес, сонымен қатар құрлысын топтастыру негіздері микроорганизмдердің физиологиялық, биохимиялық және генетикалық ерекшеліктерін ескеру керек. Қазіргі уақытта барлық тірі организмдердің бірыңғай жіктелуі туралы айту мүмкін емес: макро — және микроорганизмдердің бірыңғай принциптерін сақтай отырып, олардың ерекшеліктері бар.

Барлық жіктемелердің негізгі кезеңдері: патшалық — бөлім — сынып (топ) — тәртіп — отбасы — род — түр. Негізгі жіктеу санаты — жалпы шығу тегі, морфологиялық және физиологиялық белгілері мен зат алмасуы ұқсас организмдердің жиынтығы.

Микроорганизмдер прокариоттар патшалығына жатады, олардың өкілдері эукариоттарға қарағанда ресімделген ядросы жоқ. Прокариоттардағы тұқым қуалайтын ақпарат жасушаның цитоплазмасында орналасқан ДНҚ молекуласында жасалған.

Микроорганизмдер үшін 1980 жылы қабылданған бірыңғай халықаралық классификация, оның негізінде Берги американдық ғалымымен ұсынылған жүйе жатыр.

Микроорганизм қандай түрге жататынын анықтау үшін әр түрлі әдістердің көмегімен оның ерекшеліктерін (клетканың түрін, спораның пайда болуын, қозғалғыштығын, ферментативті қасиеттерін) оқып, анықтауыш бойынша оның жүйелі жағдайын табу — идентификациялау қажет.

Түр ішінде варианттар бар: морфоварианттар морфологиясы бойынша, биоварианттар — биологиялық қасиеттері бойынша, хемоварианттар — ферментативті белсенділігі бойынша, сероварианттар — антигендік құрылымы бойынша, фаговарианттар — фагаларға сезімталдығы бойынша.

Микроорганизмдерді белгілеу үшін К. Линнеем енгізген жалпы биологиялық бинарлы немесе биноминалды (Қос) номенклатура қабылданды. Бірінші атауы түрді білдіреді және бас әріппен жазылады. Екінші атауы түрді білдіреді және кіші әріппен жазылады. Мысалы, Staphylococcus aureus-стафилококк алтын. Атауында микроорганизмдерді ашқан зерттеушілердің аттары көрсетілуі мүмкін: бруцеллалар-Брюстің, эшерихияның құрметіне-Эшерихтың құрметіне және т. б. аталған микроорганизмдерді зақымдайтын органдар: пневмокококтар — өкпе, менингококтар — ми қабығы және т. б.

Бактериялар
Бактериялар-хлорофилладан айырылған бір жасушалы организмдер. Бактериялық жасушаның орташа өлшемі-2-6 мкм. Белгілі бір түрдегі микроорганизмдерге тән бактериялар жасушаларының мөлшері мен нысаны әр түрлі факторлардың әсерінен өзгеруі мүмкін (бактериялық дақылдың жасына, тіршілік ету ортасына және т.б. байланысты). Бұл құбылыс полиморфизм деп аталады.

Жасушаның түрі бойынша бактериялар үш топқа бөлінеді: шар тәрізді, таяқша тәрізді және бұрылған (күріш. 4).

Шар тәрізді бактериялар кокки деп аталады (лат. клетканың диаметрі 0,5-тен 1 мкм-ге дейін. Нысаны кокктарға әр түрлі: сфералық, ланцетовидная, бобовидная. Жасушалардың өзара орналасуы бойынша кококтар арасында бөлгеннен кейін: микрококтар (лат. micros-кіші) — жасушалар әртүрлі жазықтықтарда бөлінеді және бірқалыпты орналасады; дипломокка (лат. diploos — Қос) — жасушалар бір жазықтықта бөлінеді және содан кейін екіге бөлінеді; оларға ланцет тәрізді пневмококтар және бұршақ тәрізді гонококтар және менингококтар; стрептококтар (лат. streptos — тізбек) — жасушалар бөлінеді, бір жазықтықта емес тарайды құра отырып, тізбекті; стафилококктар (лат. staphyle — гроздь) — жасушалар бөлінеді, әр түрлі жазықтықта құра отырып, жиналған түрінде грозди жүзім; тетракокки (лат. tetra-төрт) — жасушалар екі өзара перпендикуляр жазықтықта бөлінеді және төрт; сарциналар (лат. sarcio-қосылыс) — жасушалар өзара перпендикуляр үш жазықтықта бөлінеді және әрқайсысында 8 немесе 16 жасушадан түктер немесе пакеттер түрінде орналасады.

Кокки сыртқы ортада, сондай-ақ адам мен жануарлар ағзасында кең таралған. Микококтарды, тетракокктарды және сарциндерді қоспағанда, барлық дерлік кокк топтары инфекциялық аурулардың қоздырғыштарын қамтиды.

Таяқша тәрізді түрлер бактериялар деп аталады. Олардың орташа өлшемдері ұзындығы 1-ден 6 мкм-ге дейін және қалыңдығы 0,5-тен 2 мкм-ге дейін.

Бактериялар сыртқы түрі бойынша ерекшеленеді: олардың ұштары дөңгелектелген (ішек таяқшасы), шабылған (күйдіргі қоздырғышы), өткір (оба қоздырғышы) немесе қалыңдатылған (дифтерия қоздырғышы) болуы мүмкін. Бактериялар бөлінгеннен кейін қосарланған — диплобактериялар (клебсиеллар), тізбек (күйдіргі қоздырғышы), кейде бір-біріне бұрышпен немесе крест-крест (дифтерия қоздырғышы) орналасуы мүмкін. Бактериялардың көпшілігі ретсіз орналасқан.

Бактериялар арасында иілген түрлер — вибриондар (тырысқақ қоздырғышы) кездеседі.

Алынған түрлерге спирилдер мен спирохеттер жатады. Олардың жасушалары спиральға ұқсайды. Көптеген спирилдер ауыр емес.

Бактериялық жасушаның құрылысы
Бактериялық жасушаның құрылысын зерттеу үшін жарық микроскопымен қатар бактериялық жасушаның ультрастырылуын анықтауға мүмкіндік беретін электронды-микроскопиялық және микрохимиялық зерттеулер қолданылады.

Бактериялық жасуша (күріш. 5) мынадай бөліктерден тұрады: үш қабатты қабық, әртүрлі қоспалары бар цитоплазма және ядролық зат (нуклеоид). Қосымша құрылымдық құрылымдар капсулалар, даулар, жгутиктер, сыра болып табылады.

Сур. 5. Бактериялық жасушалар құрылысының схемалық бейнесі. 1-қабық; 2 — шырышты қабат; 3 — жасушалық қабырға; 4 — цитоплазмалық мембрана; 5 — цитоплазма; 6 — рибосома; 7 — полисома; 8 — қосу; 9 — нуклеоид; 10-жгутик; 11-пили
Сур. 5. Бактериялық жасушалар құрылысының схемалық бейнесі. 1-қабық; 2 — шырышты қабат; 3 — жасушалық қабырға; 4 — цитоплазмалық мембрана; 5 — цитоплазма; 6 — рибосома; 7 — полисома; 8 — қосу; 9 — нуклеоид; 10-жгутик; 11-пили

Жасушаның қабығы сыртқы шырышты қабаттан, жасушалық қабырғадан және цитоплазмалық мембранадан тұрады.

Шырышты капсула қабаты жасушаның сыртында орналасқан және қорғаныс функциясын орындайды.

Клеткалық қабырға-клетканың негізгі құрылымдық элементтерінің бірі, оның пішінін сақтайтын және клетканы қоршаған ортадан бөлетін. Жасушалық қабырғаның маңызды қасиеті жасушаға қажетті қоректік заттардың (аминқышқылдар, көмірсулар және т.б.) енуін және жасушадан алмасу өнімдерін шығаруды қамтамасыз ететін сайлау өткізгіштігі болып табылады. Жасушалық қабырға жасушаның ішінде тұрақты осмотикалық қысымды сақтайды. Қабырғаның беріктігі муреин, полисахаридті зат қамтамасыз етеді. Кейбір заттар клеткалық қабырғаны бұзады, мысалы, лизоцим.

Жасушалық қабырғадан толық айырылған бактериялар протопласт деп аталады. Олар тыныс алу, бөлу, ферменттер синтезі қабілетін сақтайды; сыртқы факторлардың әсеріне: механикалық зақымдану, осмотикалық қысым, аэрация және т.б. протопласттарды тек гипертониялық ерітінділерде сақтауға болады.

Жасушалық қабырғасы ішінара бұзылған бактериялар сферопласт деп аталады. Егер пенициллиннің көмегімен жасушалық қабырғаның синтездеу процесін бассаңыз, онда бактериялардың барлық түрлерінде вакуольдері бар шар тәрізді ірі және ұсақ жасушалар болатын L-формалар пайда болады.

Цитоплазмалық мембрана ішкі жағынан жасушалық қабырғаға тығыз жанасады. Ол өте жұқа (8-10 нм) және ақуыздар мен фосфолипидтерден тұрады. Бұл жасушаның қоректенуі жүзеге асырылатын шекаралық жартылай өткізбейтін қабат. Мембранада заттарды белсенді тасымалдауды жүзеге асыратын пермеаз ферменттері және тыныс алу ферменттері болады. Цитоплазмалық мембрана жасушаны бөлуге қатысатын мезосомалар құрайды. Жасушаны гипертониялық мембрана ерітіндісіне орналастыру кезінде жасушалық қабырғадан бөлінуі мүмкін.

Цитоплазма-бактериялық жасушаның ішкі мазмұны. Ол Судан, ақуыздардан, көмірсулардан, липидтерден, түрлі минералды тұздардан тұратын коллоидтық жүйе болып табылады. Цитоплазманың химиялық құрамы мен консистенциясы жасушаның жасына және қоршаған орта жағдайына байланысты өзгереді. Цитоплазмада ядролық зат, рибосомалар және түрлі қосылыстар бар.

Нуклеоид, жасушаның ядролық заты, оның тұқым қуалайтын аппараты. Прокариоттардың ядролық зат эукариотқа қарағанда өз мембранасы жоқ. Ересек жасушаның Нуклеоид-сақинаға оралған екі ДНҚ жіп. ДНҚ молекуласында жасушаның генетикалық ақпараты кодталған. Генетикалық терминология бойынша ядролық зат генофор немесе ген деп аталды.

Рибосомалар жасушаның цитоплазмасында және ақуыз синтезі функциясын атқарады. Рибосома құрамына 60% РНК және 40% ақуыз кіреді. Тордағы рибос саны 10000-ға жетеді. Соединяясь бірге, рибосомы құрайды полисомы.

Қосылыстар-құрамында әртүрлі қосалқы қоректік заттар бар түйіршіктер: крахмал, гликоген, май, волютин. Олар цитоплазмада орналасқан.

Бактериялардың жасушалары тіршілік ету процесінде қорғаныш органеллалар-капсулалар мен дауларды құрайды.

Капсула — жасушалық қабырғаға жанасатын сыртқы тығыздалған шырышты қабат. Бұл адам мен жануарлар ағзасына түскен кезде кейбір бактерияларда пайда болатын қорғаныс органы. Капсула микроорганизмдерді ағзаның қорғаныш факторларынан қорғайды (пневмония және күйдіргі қоздырғыштары). Кейбір микроорганизмдердің тұрақты капсуласы (клебсиеллар) бар.

Даулар тек таяқ тәрізді бактерияларда кездеседі. Олар микроорганизмдердің сыртқы ортаның қолайсыз жағдайларына (жоғары температураның әсері, кебу, рН өзгеруі, ортадағы қоректік заттар мөлшерінің азаюы және т.б.) түскенде пайда болады. Споралар бактериялық жасушаның ішінде болады және нуклеоидты цитоплазманың тығыздалған бөлігін білдіреді. Химиялық құрамы бойынша олар вегетативтік жасушалардан судың аз мөлшерімен, липидтер мен кальций тұздарының ұлғаюымен ерекшеленеді, бұл спораның жоғары тұрақтылығына ықпал етеді. Дау пайда болуы 18-20 сағат ішінде болады; микроорганизмдер даудың қолайлы жағдайына түскенде 4-5 сағат ішінде вегетативтік түрге өседі. Бактериялық жасушада тек бір дау ғана пайда болады, демек, даулар көбею органдары болып табылмайды, қолайсыз жағдайларды бастан кешіру үшін қызмет етеді.

Спорообразующие аэробты бактериялар деп аталады бациллами, ал анаэробты — клостридиями.

Даулар нысаны, өлшемі және торда орналасуы бойынша ерекшеленеді. Олар орталық, субтерминалды және терминалды орналасуы мүмкін (сурет. 6). Сібір жарасы қоздырғышында даудың ортасы орналасады, оның мөлшері жасушаның көлденең бөлігінен аспайды. Ботулизм қоздырғышының дау жасушаның соңына жақын орналасқан-субтерминальды және жасушаның енінен асады. Сіреспе қоздырғышында дөңгелек дау жасушаның соңында-терминалды және жасушаның енінен едәуір асады.

Жгутиктер-қозғалыс мүшелері, таяқша тәрізді бактерияларға тән. Бұл ақуыз-флагеллиннен тұратын жұқа жіп тәрізді фибриллалар. Олардың ұзындығы бактериялық жасушаның ұзындығынан едәуір асады. Жгутиктер цитоплазмада орналасқан базальды тельцтен шығып, жасушаның бетіне шығады. Олардың болуын микроскоппен, жартылай сұйық қоректік ортада немесе арнайы әдістермен бояу кезінде жасушалардың қозғалуын анықтау бойынша анықтауға болады. Жгутиктердің ультраструктурасы электронды микроскоппен зерттелген. Жгутиктердің орналасуы бойынша бактериялар топтарға бөлінеді (күріш. 6): монотрихтер — бір жгутикпен (тырысқақ қоздырғышы); амфитрихтер — жасушаның екі ұшындағы бумалармен немесе бірлі — жарым жгутиктермен (спириллалар); лофотрихтер — жасушаның бір ұшындағы жгутиктер шоғырымен (нәжістік сілтілік түзгіш); перитрихтер-жгутиктер жасушаның барлық бетінде орналасқан (ішек бактериялары). Бактериялардың қозғалыс жылдамдығы жгутиктердің саны мен орналасуына (монотрихтер неғұрлым белсенді), бактериялардың жасына және қоршаған факторлардың әсеріне байланысты.

Сур. 6. Споралар мен жгутиктердің бактериялардың орналасу нұсқалары. I — даулар: 1 — орталық; 2 — субтерминалды; 3 — терминалды; II — жгутиктер: 1 — монотрихи; 2 — амфитрихи; 3-лофотрихи; 4-перитрихи
Сур. 6. Споралар мен жгутиктердің бактериялардың орналасу нұсқалары. I — даулар: 1 — орталық; 2 — субтерминалды; 3 — терминалды; II — жгутиктер: 1 — монотрихи; 2 — амфитрихи; 3-лофотрихи; 4-перитрихи

Сыра немесе фимбрия-бактериялық жасушалардың бетінде орналасқан ворсинки. Олар қысқа және жұқа жгутиктер және спиральды құрылымы бар. Ақуыз — пилиннен тұрады. Бір сыра (олардың бірнеше жүздері) бактерияларды жануарлар мен адамның жасушаларына бекіту үшін қызмет етеді, басқалармен (бірлі-жарым) генетикалық материалды жасушадан жасушаға беру байланысты.

Микоплазмалар

Микоплазма-жасушалық қабырғасы жоқ, бірақ үш қабатты липопротеидті цитоплазмалық мембранамен қоршалған жасушалар. Микоплазмалар сфералық, сопақ, жіп және жұлдыз түрінде болуы мүмкін. Берга классификациясы бойынша микоплазмалар жеке топқа бөлінген. Қазіргі уақытта бұл микроорганизмдерге қабыну сипатындағы аурулардың қоздырғыштары ретінде көп көңіл бөлінеді. Олардың өлшемдері әртүрлі: бірнеше микрометрден 125-150 нм дейін. Ұсақ микоплазмалар бактериялық сүзгіштер арқылы өтеді және сүзілетін нысандар деп аталады.

Спирохеттер
Спирохеты (суретті қараңыз). 52) (лат. speira-иілу, chaite-шаш)-ұзындығы 5-тен 500 мкм-ге дейін және ені 0,3-0,75 мкм-ге дейін өлшемдері бар жіңішке, бұралған, жылжымалы бір жасушалы организмдер. Олардың ең қарапайымдыларымен фибрилл шоғырынан тұратын ішкі осьтік жіпті қысқарту арқылы қозғалыс тәсілі. Спирохет қозғалысының сипаты әртүрлі: үдемелі, айналмалы, иілгіш, толқын тәрізді. Қалған жасушаның құрылысы бактерияларға тән. Кейбір спирохеттер анилин бояғыштарымен нашар боялады. Спирохет жіптердің саны мен формасы және оның аяқталуы бойынша босануға бөлінеді. Табиғатта және адам ағзасында таралған сапрофитті формалардан басқа, спирохет арасында ауру тудыратын-мерез қоздырғыштары және басқа да аурулар бар.

Риккетсиялар
Риккетсиялар-мөлшері 0,2-ден 30 мкм дейінгі микроорганизмдер. Олар бактериялар үшін кәдімгі жасушаның құрылымы бар: екі қабатты қабық, цитоплазма, нуклеоид. Риккетсияның нысаны бойынша таяқша тәрізді, жіп тәрізді және кокковидті болуы мүмкін. Барлық риккетсиялар жасушаішілік паразиттер, яғни тірі ағзаның жасушаларында ғана дами алады. Олар бөртпе сүзегі мен түрлі қызба сияқты жұқпалы ауруларды тудырады. Риккетсияның тасымалдаушылары-буынаяқтылар: кенелер, вши және блохтар, олардың ағзасында риккетсиялар көбейеді.

Вирустар
Вирустар (суретті қараңыз). 53) — жасушалық емес құрылыстың ең кіші ағзалары. Вирустық бөлшектер вирион деп аталады. Вириондардың өлшемдері 15-тен 400 нм-ге дейін. Вирустардың көпшілігі электрондық микроскоп арқылы ғана көруге болады. Вирион қабығы, капсид, ақуыз молекулаларынан тұрады. Ішінде бір ғана түрдегі нуклеин қышқылы — ДНК немесе РНК бар. Нуклеин қышқылының түрі бойынша вирустар екі топқа бөлінеді — ДНК және РНК вирустар. Барлық вирустар облигациялық (міндетті) паразиттер болып табылады және зертханаларда тауық эмбриондарында, жануарлар организмінде немесе ұлпалар өсіндісінде өсіріледі. Вирионның түрі әртүрлі: сфералық, таяқша тәрізді, кубоидальды және сперматозоидты. Вирустардың көбеюі шаршының жасушасында қабық пен нуклеин қышқылын бөлек синтездеу арқылы жүзеге асырылады. Бұл процесс репродукция деп аталады. Иесі ағзасында кейбір вирустар жасушаішілік қосындыларды және қарапайым жарық микроскопында көрінетін элементар торларын құрайды, өйткені олардың көлемі бірнеше микрометрді құрайды. Бұл білім диагностикалық маңызы бар. Вирустар бактериялар, өсімдіктер, жануарлар ауруларын тудырады. Адамның вирустық табиғаттың аса маңызды инфекциялық аурулары тұмау, қызылша, полиомиелит, гепатит және құтыру болып табылады.

Вирустар арасында фаг тобы (лат. phagos — пожирающий) тудыратын лизис (қирату) жасушалар микроорганизмдер. Вирустарға тән қасиеттері мен құрамын сақтай отырып, фаги вирион құрылымымен ерекшеленеді (8-тарауды қараңыз). Олар адам мен жануарлар ауруларын тудырмайды.

Бақылау сұрақтары
1. Микроорганизмдердің жіктелуі туралы айтып беріңізші.

2. Прокариоттар патшалығы өкілдерінің негізгі қасиеттерін атаңыз.

3. Бактериялардың негізгі түрлерін атаңыз және сипаттаңыз.

4. Клетканың негізгі органеллаларын және олардың арналуын атаңыз.

5. Бактериялар мен вирустардың негізгі топтарына қысқаша сипаттама беріңіз.

Микроорганизмдердің морфологиясын зерттеу
Микроорганизмдер морфологиясын зерттеу үшін микроскопиялық зерттеу әдісі қолданылады. Бұл әдісті сәтті пайдаланудың маңызды шарты-зерттелетін материалдан немесе бактериялық дақылдардан жағынды дұрыс дайындау. Зертханалық жағдайда қоректік ортада өсірілген микроорганизмдер дақыл деп аталады.

Жағынды дайындау техникасы
Жұмыс істеу үшін таза және майсыздандырылған заттық және жабынды шынылар болуы қажет. Жаңа шынылар 15-20 мин 2-5% сода ерітіндісінде немесе сабынды суда қайнатады, сумен шайып, әлсіз хлорлы сутегі қышқылына салады, содан кейін сумен мұқият жуады.

Пайдалануда болған және бояғыштармен немесе иммерсиондық маймен ластанған шыныларды екі тәсілмен өңдеуге болады: 1) концентрацияланған күкірт қышқылына немесе хром қоспасына 2 сағат тиеу, содан кейін мұқият жуу; 2) сода немесе сілтінің 5% ерітіндісінде 30-40 мин қайнату. Өңделмеген шыныларды сабынмен сүртіп, содан кейін құрғақ шүберекпен тазалауға болады.

Назар аударыңыз! Егер шыны жақсы майсыздандырылған болса, онда су тамшылары ұсақ тамшыларға түспестен біркелкі ағады.

Шыны ыдыстарда Никифоров қоспасында (спирт пен эфирдің тең көлемі) немесе 96% спиртте сақталады. Шыны ерітінділерінен пинцетпен алынады.

Назар аударыңыз! Шыныны саусақпен қырынан ұстап тұрыңыз.

Зерттеуге арналған Материал заттық шыныға бактериялық ілмектер, инемен немесе пастер пипеткасымен салынады. Көбінесе бактериялық Ілмек (күріш. 7) ұзындығы 5-6 см платина немесе нихромды жіптен жасалған. Сымның соңы 1×1,5 немесе 2×3 мкм көлемінде сақина түрінде бүгіледі.

Сур. 7. Егуге арналған ине мен ілмектер. 1-ине; бактериялық ілмектер: 2, 3-ілмектер дұрыс дайындалған; 4-ілмектер дұрыс дайындалған
Сур. 7. Егуге арналған ине мен ілмектер. 1-ине; бактериялық ілмектер: 2, 3-ілмектер дұрыс дайындалған; 4-ілмектер дұрыс дайындалған

Назар аударыңыз! Суға батқан және алынған кезде дұрыс дайындалған ілмектер су пленкасын сақтайды.

Жағынды дайындау алдында ілмектің жұмыс бөлігі горелканың жалынында тік күйде: алдымен ілмектің өзі, содан кейін металл өзегі болады. Бұл манипуляцияны егу аяқталғаннан кейін де жүргізеді.

Сұйық қоректік ортада өсірілген дақылдардан жағынды дайындау. Майсыздандырылған зат шынысы жанарғының жалынына жанады және салқындатады. Тұғырыққа (Петри тостағанына, штативке) орналастырылған зат шынысына дақылды жағады. Дақылы бар түтікті сол қолдың үлкен және көрсеткіш саусақтарымен ұстайды. Ілмекті оң қолында ұстайды. Ілмекті ішпестен оң қолдың мизинциясымен тығынды алақанға қысып, оны түтіктен абайлап алып тастайды. Қозғалыс тегіс және тыныш болуы керек. Шыны түтікшелердің мойнын жанарғының жалынына күйдіреді. Ілмекті пробиркаға енгізеді. Шыны түтіктің қабырғасы туралы ілмекті салқындатады және содан кейін оны дақылға салады. Шығарып алады болады, кетпей оның қабырғаларының пробиркалар. Тығынды алдын ала оттықтың жалыны арқылы жүргізіп жабады. Қояды пробиркаға да штатив. Ілмектер дақылды заттық шыныға жағады, айналмалы қозғалыстармен оны біркелкі үлестіреді. Содан кейін ілмекті жанарғылардың жалындарында күйдіреді. Жағынды құрғату үшін қалдырады.

Назар аударыңыз! Жағынды біркелкі тарылтылған, жіңішке және шағын (екі қабатты монетасы бар) болуы тиіс.

Тығыз қоректік ортада өсірілген дақылдардан жағынды дайындау. Дайындалған зат шынысына пастер пипеткасымен немесе натрий хлоридінің изотоникалық ерітіндісінің тамшысын (0,9%) жағады. Дақылдарды агардан Петри түтікшесінде немесе тостағышта абайлап шешіп, шыныдағы тамшыда эмульгациялайды. Дайындалған жағынды біркелкі және қалың болмауы тиіс. Ол заттық шыныда құрғаған кезде әлсіз ұшу қалады.

Іріңді немесе қақырықтан жағынды дайындау. Материалды стерильді пипеткамен немесе ілмектермен алады және заттық шынының ортасына жағады. Екінші заттық шынымен бірінші және екінші шынының үштен бірі бос қалуы үшін бірінші жабады. Күші бар әйнектер жаққа жылжытады. Екі үлкен жағынды алады.

Қаннан жағынды дайындау. Қан тамшысын сол жақ шетінен үштен бір қашықтықта заттық шыныға салады. Содан кейін арнайы тегістелген шынының шеті, оны 45° бұрышына еңкейтіп, қан тамшысына тиеді. Тегістелген әйнек оны алға жылжытады. Дұрыс дайындалған жағындының сарғыш түсі бар және жарқырайды.

Мәйіттің ішкі мүшелерінен және қатты консистенциялы Тамақ өнімдерінен жұғынды-іздер дайындау. Ағзаның немесе тағамдық өнімнің беті қыздырылған скальпельмен жағылады және осы учаскеден материал кесектерін кеседі. Пинцетпен бұл бөлікті абайлап ұстайды және кесіктің бетін екі — үш жерде заттық шыныға тиеді, жағынды-іздер қатарын жасайды.

Жағынды кептіру
Жағынды бөлме температурасында ауада кептіреді. Қажет болған жағдайда оны жанарғының жанарғысының жанында кептіруге болады, шыныны үлкен және көрсеткіш саусақпен жоғары жағындымен көлденең күйде ұстап.

Назар аударыңыз! Жоғары температурада жасушалар құрылымының бұзылуы болуы мүмкін.

Жағынды бекіту
Жағындылар толық құрғағаннан кейін мынадай мақсатта белгіленеді: 1) шыныда микроорганизмдерді бекіту; 2) Материалды залалсыздандыру; 3) сойылған микроорганизмдер бояуды жақсы қабылдайды. Бекітілген жағынды препарат деп аталады.

Бекіту тәсілдері. 1. Физикалық-жанарғы жалынында: шыныны пинцетпен немесе үлкен және көрсеткіш саусақпен алады және үш рет жанарғы жалынының жоғарғы бөлігі арқылы 6 С бойы жүргізеді.

2. Химиялық-сұйықтықта: қан мен жұғынды-ізгілердегі жасушалық элементтер жоғары температураның әсерінен бұзылады, сондықтан оларды тіркейтін сұйықтықтардың бірімен өңдейді: а) метил спиртімен — 5 мин; б) этил спиртімен — 10 мин; в) Никифоров қоспасымен — 10-15 мин; г) ацетонмен — 5 мин; д) Қышқыл және формалин буымен — бірнеше секунд.

Препараттарды бояу
Бекітілгеннен кейін препаратты бояуға кіріседі.

Үстелде тазартылған суы бар ыдыс қажет; екі жағынан резеңке түтікшелермен жалғанған екі түтікшеден немесе таяқшадан жасалған тұғырық (препараттарды орналастыру үшін); пинцеттер, цилиндрлер, пипеткалар, Сүзгіш қағаз, бояғыштар жиынтығы, оларды ағызуға арналған сыйымдылық. Бояуға арналған үстел су құбыры кранының жанында болуы тиіс.

Микроорганизмдердің бояғыштарға қатынасы олардың тинкториалдық қасиеттері деп аталады. Микробиологияда анилин бояғыштары кеңінен қолданылады. Микроорганизмдердің көпшілігі негізгі бояғыштарды жақсы қабылдайды.

Ең көп қолданылатын бояғыштар: Қызыл (негізгі фуксин, қышқыл фуксин, қызыл конго, бейтарап қызыл); көк (метилен және толуидин); күлгін (генциан, метил, кристалды); қоңыр-сары (везувин, хризоидин); жасыл (Гауһар, малахит).

Барлық бояғыштар аморфты немесе кристалды ұнтақтар түрінде шығарылады. Олардың ішінен қаныққан спирт және фенол ерітінділерін дайындайды, содан кейін жұмыс істеу үшін сулы-спирт немесе сулы-фенол ерітінділерін пайдаланады. Егер бояу кезінде бояғыштардың концентрацияланған ерітінділерін пайдаланса, онда препаратты алдын ала бояғыш жағылатын Сүзгіш қағазбен жабады. Бұл ретте бояғыш кесектері қағазда қалады.

Назар аударыңыз! Бояғыш тамшысын барлық препаратты жабатындай етіп пипеткамен жағады.

Бояғыш рецептер
1. Спирт ерітінділері (бастапқы):

бояғыш-1 г
96% — 10 мл спирт
Қоспаны бірнеше күнге толық ерігенше термостатқа салады. Күн сайын шайқайды. Тығыны бар сауыттарда сақтайды.

2. Цилдің карбол фуксині (қышқылға төзімді микроорганизмдерді, споралар мен капсулаларды бояу үшін)):

қаныққан спирт ерітіндісі
негізгі фуксин-10 мл
5% — 90 мл карбол қышқылы ерітіндісі
Назар аударыңыз! Карбол қышқылы керісінше емес, бояғышқа құйылады.

Қоспаны бірнеше минут бойы жігерлі шайқайды,сүзеді және сақтауға арналған құтыға құяды.

3. Фуксин Пфейффера (граммен бояу үшін және қарапайым бояу әдісі үшін):

Фуксина Циля — 1 мл
тазартылған су-9 мл
Бояғыш қолданар алдында тікелей дайындалады.

4. Карбол генциандық күлгін (граммен бояу үшін):

қаныққан спирт ерітіндісі

генцианового күлгін — 10 мл

карбол қышқылы 5% — 100 мл

Ерітінділерді араластырады және қағаз сүзгі арқылы сүзеді.

5. Люголь ерітіндісі (грамм бойынша бояу үшін және крахмалға реактив):

калий йодиді-2 г
кристалды йод-1 г
тазартылған су-10 мл
Қоспаны шыны бөтелкесіне салады,жақсы тығындайды және тәулігіне термостатқа қояды, содан кейін 300 мл тазартылған су қосады.

6. Сілтілі ерітіндісі, метиленді көк Леффлера:

қаныққан спирт ерітіндісі
метилен көк-30 мл
1% — 1 мл калий гидроксиді ерітіндісі
тазартылған су-100 мл
7. Қағаздар бойынша Синеву (Грам бойынша бояу үшін):

1% спирт ерітіндісі кристалды күлгін
Сүзгіш қағаз жолақтарын ерітіндімен сіңдіреді және кептіреді.

Бояу әдістері бактериялық жасушаның химиялық және құрылымдық ерекшеліктерін анықтайтын болжамды (қарапайым) және дифференциалды (күрделі) болып бөлінеді.

Қарапайым бояу әдісі
Препаратты бояуға арналған тұғырыққа, зерттелетін материалмен жоғары орналастырылады. Пипеткамен оған бояғыш ерітіндісін жағады. Көрсетілген уақыт өткеннен кейін бояғышты абайлап құйып, препаратты сумен жуады және сүзгіш қағазбен кептіреді. Қарапайым әдіс кезінде бір бояғыш қолданылады. Метилен көк және сілтілі көк Лефлер препаратын 3-5 мин бойы, Пфейффер фуксинімен — 1-2 мин бойы бояады (күріш. 4).

Боялған және кептірілген препаратқа иммерсиондық май тамшысын жағады және иммерсиондық жүйенің көмегімен микроскопиялайды.

Бояудың күрделі әдістері
Граммен бояу (әмбебап әдіс). Дифференциалды бояудың ең көп таралған әдісі-граммен бояу.

Бояу нәтижелеріне байланысты барлық микроорганизмдерді екі топқа бөледі — грамоң және грамтеріс.

Грамоң бактериялар жасушалық қабырғада РНҚ магний тұзы бар, ол йодпен және негізгі бояғышпен (генциан, метил немесе кристалды күлгін) кешенді қосылыс жасайды. Бұл кешен спирттің әсерінен бұзылмайды және бактериялар күлгін түс сақтайды.

Грамтеріс бактериялар негізгі бояуды ұстап тұра алмайды, өйткені РНК магний тұзы жоқ. Спирттің әсерінен бояғыш жуылады, жасушалар түссізденеді және қосымша бояғышпен (фуксинмен) қызыл түске боялады.

1. Препаратқа Синеваға қағаз салады және бірнеше тамшы су немесе генциандық күлгін ерітіндісін жағады. Қағазды алып тастаңыз немесе бояғыш құйыңыз.

2. Сумен жумай, Люголь ерітіндісін тегістеуге дейін (1 мин) жағады, содан кейін бояғыш құйылады.

3. Сумен шайылмастан, бояғыш (30-60 с) кеткенге дейін 96% спирт жағады. Препаратты 1-2 С-ға спиртпен стаканға түсіруге болады.

4. Препаратты сумен жуады.

5. Пфейффер фуксинмен 3 мин бояйды, сумен жуып, кептіреді.

Иммерсиондық жүйенің көмегімен микроскопиялайды.

Цилю-Нильсен бойынша бояу(қышқылға төзімді бактериялар үшін). Бұл әдіс туберкулез бактерияларын және жасушалардың қабығында көптеген липидтер, балауыз және оксик қышқылдары бар тапсырыстарды анықтау үшін қолданылады. Қышқыл, сілті және спиртке төзімді бактериялар. Жасушалық қабырғаның өткізгіштігін арттыру үшін бояудың бірінші кезеңі қыздыру кезінде жүргізіледі.

1. Бекітілген препаратты Сүзгіш қағазбен жабады және Циль фуксинін жағады. Шыныны пинцетпен ұстай отырып, препарат жанарғының жалынымен будың шығып кетуіне дейін қыздырылады. Бояғыштың жаңа бөлігін қосып, тағы 2 рет жылытады. Салқындатылғаннан кейін қағазды алып, препаратты сумен жуады.

2. Препаратты ерітіндіге 2-3 рет батырып немесе қышқылды шыныға құйып, күкірт қышқылының 5% ерітіндісімен бояйды, содан кейін бірнеше рет сумен жуады.

3. Метилен Көкінің сулы-спиртті ерітіндісімен 3-5 мин бойы сырланады, сумен жуады және кептіреді.

Иммерсиондық жүйенің көмегімен микроскопиялайды.

Қышқылға төзімді бактериялар қызыл түске, қалғандары көк түске боялады (күріш. 4).

Ожешко бойынша бояу (дауды анықтау). 1. Ауада кептірілген жағындыға 0,5% хлор сутегі қышқылы ерітіндісінің бірнеше тамшысын құйып, бу пайда болғанға дейін қыздырады. Препаратты кептіреді және Жалын үстінде бекітеді.

2. Циль-Нильсен тәсілі бойынша боялады. Қышқылға төзімді даулар қызғылт-қызыл, ал бактериялық тор — көк түске боялады (күріш. 4).

Бурри-Гинс бойынша бояу (капсуланы анықтау). Бұл әдіс теріс деп аталады, өйткені препараттың фоны мен бактериялық жасушасы боялады, ал капсула боялмаған.

1. Заттық шыныға 10 есе ажыратылған қара тушаның тамшысын жағады. Оған мәдениет тамырын енгізеді. Ажарлау шынысының қабырғасы қан жағындысы сияқты жағынды жасайды және кептіреді.

2. Химиялық тәсілмен спиртпен немесе сулемамен бекітеді. Абайлап сумен жуады.

3. Ауада мұқият жуылады және кептіреді.

Назар аударыңыз! Препаратты зақымдамау үшін Сүзгіш қағазды қолданбаңыз.

Иммерсиондық жүйенің көмегімен микроскопиялайды. Препараттың фоны қара, клеткалар-қызыл, капсулалар-боялмаған (күріш. 4).

Микроорганизмдерді тірі кезінде бояу
Тірі дақылдарды зерттеу үшін көп мөлшерде метилен көк және басқа да бояулар қолданылады (1: 10000). Зерттелетін материалдың тамшысын зат шынысында бояғыш тамшысымен араластырады және жабынды шынымен жабады. 40×линза көмегімен микроскопиялайды.

Микроорганизмдердің қозғалысын зерттеу
Зерттеу үшін сұйық қоректік ортада өсірілген бактериялар дақылдарын немесе натрий хлоридінің изотониялық ерітіндісінде бактериялардың жүзіндісін пайдаланады.

Ыдыратылған тамшылар әдісі. Заттық шыныға пипеткамен дақылдың тамшысын жағады және оны жабынды шынымен жабады. Үшін образовывалось ауа көпіршіктерін, жамылғы шыны сана қырымен шетіне капли және күрт түсіреді. Препаратты құрғаудан сақтау үшін оны ылғалды камераға салады.

Ылғалды камера-Петри кесе, оның түбінде ылғалды сүзгі қағазы бар. Қағазға екі сіріңке салады және оларға препарат салады. Шыныаяқ қақпақпен жабылады.

Линза 40Х үлкейген кезде қараңғы өрісте микроскопияланады (2-тарауды қараңыз).

Аспалы тамшылар әдісі (күріш. 8). Препаратты дайындау үшін шұңқыры бар шыны, жабынды шыны және вазелин қажет. Шұңқыр шеттерін вазелиннің жұқа қабатымен жабады.

Сур. 8. Аспалы тамшы бар Камера
Сур. 8. Аспалы тамшы бар Камера

Жабынды шыныға дақылдың тамшысын жағады. Содан кейін жабынды шыныны тамшы ортасында болатындай шұңқырмен жабады. Желімделген шыныны жабынды шынымен жылдам жоғары бұрайды. Тамшы герметикалық камерада болады және ұзақ уақыт сақталады. Микроскопия кезінде алдымен (8×) аз ұлғайған кезде тамшы шетін табады, содан кейін препаратты көп ұлғайған кезде зерттейді.

Бақылау сұрақтары
1. Бактериялық ілгекті қалай дайындау керек?

2. Жағындыларды бекітудің мақсаты мен тәсілдерін атаңыз.

3. Негізгі бояғыштарды атаңыз.

4. Микроорганизмдердің қозғалысын қандай әдістермен зерттейді?

Тапсырма
1. Дайын препараттарды алыңыз, оларды зерттеңіз және микроорганизмдердің негізгі түрлерін суреттеңіз.

2. Әр түрлі материалдан (дақылдар, ірің, қан, жағындылар-іздер) жағындылар дайындаңыз.

3. Препаратты күрделі әдістермен бояңыз (грамм, Цилю — Нильсен, Ожешко, Бурри — Гинс бойынша).

Басқа да ұқсас мәліметтер

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *